DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DE LAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS

DEFINICIÓN

El diagnóstico microbiológico es el conjunto de procedimientos y técnicas complementarias empleadas para establecer la etiología del agente responsable de una enfermedad infecciosa.

MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO

DIRECTOS

Implica la demostración del agente, sus metabolitos o componentes antigénicos en los fluidos orgánicos.

INDIRECTOS

Implica la demostración de la huella que el agente ha dejado en su contacto con el sistema inmunocompetente.

LABORATORIO

Permite aportar datos preliminares o definitivos de agentes etiológicos sobre la base de los siguientes métodos :

EXAMEN MICROSCÓPICO DE ESPECÍMENES (o EXAMEN DIRECTO)

Puede realizarse en:

• Examen microscopico en FRESCO.
• Examen microscopico después de realizar una TINCIÓN.

CRECIMIENTOS EN CULTIVOS

Pueden realizarse en:

• Cultivos solidos: utilizan medios solidos como el Agar.
• Cultivos liquidos: caldos de cultivo.

EVIDENCIA INDIRECTA DE CRECIMIENTO

Por ejemplo, el efecto citopático de algunos virus.

TÉCNICAS INMUNITARIAS

Estas pruebas detectan:

• ANTIGENOS MICROBIANOS.
• ANTICUERPOS: en líquidos orgánicos.

EXAMEN EN FRESCO

• Resulta útil en INFECCION BACTERIANA AGUDA, ya que la presencia de leucocitos polimorfonucleares es la señal de ella.
• ESTUDIOS PARASITOLÓGICOS DE LAS HECES: el exámen directo de una suspención fecal en solución salina permite visualizar el movimiento de las formas vegetativas.
• ESTUDIO PARASITOLOGICO DEL LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO (LCR): el examen directo del líquido cefalorraquideo permite visualizar el movimiento de parásitos como trypanosoma cruzi.
• ESTUDIO DE LCR CON TINTA CHINA: en los casos de meningitis por Cryptococcus permite la visualizacion del germen con su capsula de gran espesor.
• VISUALIZACIÓN DE MICELIOS FÚNGICOS: en diversos productos patológicos. La adición de KOH al 10% consigue la disociación de células y fibras, facilitando su visualización.
• VISUALIZACIÓN DE TREPONEMAS Y LEPTOSPIRAS: se realiza mediante el examen directo de material patológico por medio de la técnica de campo oscuro (utilizando el microscopio de campo oscuro).

TINCIONES UTILIZADAS HABITUALMENTE

TINCION DE GRAM

La coloración de Gram es la más utilizada en bacteriología ya que, además de precisar la MORFOLOGÍA Y AGRUPACION DE LAS BACTERIAS, permite su clasificación en GRAM POSITIVOS o GRAM NEGATIVAS en función de la estructura de pared.

Bacilos Gram positivos (bastones "violetas" y células descamadas)

Pocas técnicas asocian su sencillez, rapidez y riqueza de información y es por ello que a pesar del desarrollo de métodos sofisticados para el diagnóstico rápido de enfermedades infecciosas, no se ha podido reemplazar la utilizadad de la tinción de GRAM.

MICROORGANISMOS DETECTADOS: Bacterias y Cándida.

INFORME BACTERIOLÓGICO (COLORACIÓN DE GRAM): 

a) No se observan gérmenes.
b) Se observan: Cocos Gram positivos, Bacilos Gram negativos, etc.

ZIEHL-NEELSEN, KINYOUN, AURAMINA-RODAMINA: 

Todas estas coloraciones aprovechan el alto contenido lipídico de la pared de las micobacterias para su detección.En la práctica el término Bacilo Acido Alcohol Resistente (B.A.A.R.) puede considerarse sinónimo de micobacterias, aunque existen otras especies, por ej. Nocardia, con caracteríticas de ácido alcohol resistente variable.

MICROORGANISMOS DETECTADOS: micobacterias.

INFORME BACTERIOLÓGICO (BACILOSCOPÍA): 

a) No se observan B.A.A.R.
b) Se observan B.A.A.R. 

DETECCIÓN DE MOLÉCULAS MICROBIANAS ESPECÍFICAS

Los avances de la biología molecular han facilitado el desarrollo de técnicas rápidas que permiten la detección de moléculas específicas propias de un determinado microorganismo. Estas técnicas son independientes del cultivo y se conocen los siguientes grupos :  

1) Deteccion de Antigenos Especificos por técnicas inmunológicas :

• Aglutinación en latex.
• Coaglutinación.
• Contrainmunoelectroforesis.
• Enzimoinmunoanálisis.
• Inmunofluorescencia.

2) Técnicas de hibridación de Sondas de DNA.
3) Reacción en cadena de la polimerasa (P.C.R.).
Branched DNA (b DNA).